Sinteză dificilă și hidrofobă a peptidelor

Sinteză dificilă a peptidelor|Personalizare peptidă hidrofobă|Sinteză dificilă a peptidelor|Sinteza secvenței cluster|Știință-Peptide

Secvența de peptide este prea hidrofobă? Agregați ușor? Mai multe perechi de legături disulfurice? Știință-Serviciile de sinteză dificilă a peptidelor și sinteză hidrofobă a peptidelor sunt specializate în tot felul de ani de experiență „nu se poate face”. 20, sisteme de solvenți speciali, livrare stabilă. Vă rugăm să nu ezitați să ne contactați.

Ce fel de peptide sunt considerate „dificile”?
De 20 de ani în domeniul sintezei de peptide, am văzut tot felul de peptide dificile. Când clienții vin la noi, au întrebat deja mai multe companii, iar răspunsul pe care îl primesc este fie „Nu pot”, fie „Încercați, fără garanție”.

Peptidă cu hidrofobicitate puternică: regiune transmembranară, peptidă semnal, aminoacid hidrofob, atunci când este sintetizat, va fi aglomerat pe rășină, iar aminoacidul din spatele ei nu va putea intra.
Peptidele care sunt ușor de agregat, cum ar fi peptidele amiloide și antimicrobiene, sunt îngrămădite când sunt sintetizate și înfundă coloana când sunt purificate.
Peptide cu mai multe perechi de legături disulfurice: mai mult de trei perechi, un pas greșit în ordinea de împerechere și întreaga moleculă este distrusă.
Peptidă lungă: mai mult de 60 de aminoacizi, fiecare pas al randamentului este în scădere și, în final, nu a mai rămas nimic.
Combinație complexă de modificări: fosforilare, fluorescență, ciclizare și condiții care se luptă între ele.
Le putem lua pe toate, și nu este „încercați”, ci „aveți un plan”.

1. Peptide hidrofobe: cu sisteme specializate de solvent
Dificultatea peptidelor hidrofobe constă în faptul că nu pot fi dizolvate în solvenți convenționali, iar atunci când sunt sintetizate, lanțul peptidic „se adună” pe rășină, făcând imposibilă intrarea aminoacizilor din spatele acesteia.

Soluția noastră:
Combinație specială de solvenți: sistem mixt DMF, NMP, DCM, plus puțin agent de eliberare lichid, astfel încât lanțul peptidic a fost menținut întins.
Optimizarea temperaturii: unele reacții sunt mai bune la 40 de grade decât temperatura camerei, unele trebuie coborâte la 0 grade, le-am încercat una câte una.
Selectarea rășinii: Utilizați rășină cu solubilitate ridicată pentru peptidele hidrofobe pentru a lăsa suficient spațiu pentru lanțurile peptidice.
Etichete solubilizate: Dacă nu puteți, adăugați o etichetă hidrofilă și tăiați-o după sinteză.

Caz real: o peptidă transmembranară 35aa, aminoacizii hidrofobi au reprezentat 70%, clientul a căutat trei companii nu se poate face. Am schimbat sistemul de solvenți și am adăugat etichetă de solubilizare, în cele din urmă puritatea a fost de 92%, iar clientul a făcut studiul structurii fără probleme.

2. Perechi multiple de legături disulfurice: fără noroc, strategie
Cu cât sunt mai multe legături disulfurice, cu atât este mai greu să le împerechezi. Două perechi sunt bine, dar trei sau mai multe perechi și un pas greșit și totul s-a terminat.
Strategia noastră:
Protecție ortogonală: Cys poate fi deschis și împerecheat în pași folosind diferite grupuri de protecție, cum ar fi Trt, Acm, tBu.
Optimizarea condițiilor de oxidare: oxidarea aerului, oxidarea glutationului, oxidarea iodului, diferite metode pentru diferite peptide.
QC intermediar: După fiecare pereche, luați o probă pentru MS și confirmați împerecherea înainte de a continua.
Confirmare MS/MS (opțional): ruptura finală-cu spectrometrie de masă secundară pentru a vedea unde sunt atașate de fapt legăturile disulfură.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >Puritate de 90%, legături disulfurice împerecheate corect, iar structura cristalină a fost rezolvată ulterior de către client.

3. Peptide predispuse la agregare-: sintetizarea în timpul apărării
Unele peptide iubesc în mod natural agregarea, cum ar fi proteina amiloidă și peptida antibacteriană. Ele încep să se agrega când sunt sintetizate, blochează coloana când sunt purificate și nu pot fi dizolvate când sunt în mână.
Soluția noastră:
Pseudoprolina: Pseudoprolina este introdusă în poziția Ser/Thr pentru a perturba tendința de agregare și a reveni după sinteză.
Sinteză segmentară: peptidele care sunt prea polimerizate sunt tăiate în mai multe segmente și sintetizate separat, apoi reconectate la sfârșit.
Optimizarea condițiilor de purificare: temperatură ridicată, pH acid, adăugare de solvenți organici pentru a găsi condiții care să-l facă ne-polimerizabil.

4. Combinații de modificatori complexe: condiții fără lupte
Unele peptide au cerințe multiple: fosforilare, marcare fluorescentă și ciclizare. Aceste modificări pot intra în conflict între ele -, de exemplu, fosforilarea este acid-fobă, etichetarea fluorescentă este lumina-fobă, iar ciclizarea necesită un pH specific.
Abordarea noastră:
Proiectarea strategiei de conservare: care tăiere trebuie făcută mai întâi, care tăiere trebuie făcută mai târziu, proiectată în avans.
Condiții ortogonale: Condițiile fiecărei etape a reacției nu afectează modificările deja făcute.
QC intermediar: După fiecare pas de modificare, luați o probă pentru a vă asigura că este făcut corect înainte de a continua.

5. Puritate: În funcție de ceea ce faci cu ea

Fiecare peptidă este însoțită de un raport HPLC și MS, făcând datele de puritate transparente.

1. Facem asta de 20 de ani
Sinteza dificilă a peptidelor nu este ceva ce poate face oricine. De-a lungul anilor, ne-am ocupat de o mulțime de peptide dificile: proteine ​​transmembranare, peptide de fuziune virală, conotoxine, proteine ​​amiloide, peptide antimicrobiene etc. Avem o idee bună despre care secvențe sunt predispuse la probleme și care condiții sunt capabile să le salveze. Cel puțin nu trebuie să încercați pe fiecare dintre ele dacă vii la noi pentru o sinteză dificilă și hidrofobă a peptidelor.

2. Nu este „încearcă”, este „ai un program”.
O mulțime de companii preiau peptide dificile și spun: „Vom încerca, dar nu o garantăm”. Noi nu jucăm așa. Înainte de a accepta o comandă, vom evalua secvența, care este proporția de aminoacizi hidrofobi, dacă există vreo tendință de agregare cunoscută, câte perechi de legături disulfură și dacă modificarea este complexă sau nu. După evaluare, vă vom spune: care este rata de succes și cât este durata ciclului.

Nu primim comenzi care nu pot fi făcute și trebuie să predăm comenzile pe care le-am luat.

3. Sisteme de solventi specializate pentru hidrofobicitate
Peptida hidrofobă este punctul nostru forte. Dacă solventul convențional nu poate fi dizolvat, vom schimba solventul; dacă temperatura convențională nu reacționează, vom regla temperatura; dacă rășina convențională nu rezistă, vom schimba rășina. Există, de asemenea, eticheta de solubilizare ca o cale de ieșire înapoi.

4. Mai multe perechi de legături disulfură, pas-cu-pas
Dacă există mai mult de trei perechi de legături disulfură, vom face o abordare-cu-pas cu pas: primul pas este să protejăm A și să deschidem prima pereche; protejați B și deschideți a doua pereche; protejați C și deschideți a treia pereche. După fiecare pas, luăm mostre pentru MS și confirmăm împerecherea înainte de a continua. În cele din urmă, MS/MS va fi spart și verificat, iar datele vă vor fi date fără să ghiciți.

5. Controlul calității: date la fiecare pas
Controlul calității peptidelor dificile trebuie să fie mai atent:
QC intermediar: După fiecare fragment și fiecare pas de modificare, se măsoară mai întâi puritatea și greutatea moleculară.
Produsul final: HPLC pentru puritate, MS pentru greutatea moleculară.
Test de solubilitate: Furnizați solvenți și metode de solubilizare recomandate, astfel încât să nu obțineți peptide care nu se dizolvă.
Făcând sinteză dificilă și hidrofobă a peptidelor, datele vorbesc de la sine, fiecare pas poate fi urmărit.

• Forma de livrare: pulbere liofilizata, tuburi de centrifuga sau fiole.
• Documente însoțitoare: COA (profil HPLC + spectru MS), raport de sinteză (opțional).
• Teste opționale: conținut de peptide, endotoxină, umiditate, compoziție de aminoacizi, test de solubilitate.
• Ambalare personalizată: porționare și marcare în funcție de cerințele dumneavoastră.
• Fiecare produs dificil și hidrofob de sinteză a peptidelor este revizuit pentru a se asigura că secvența este corectă și puritatea este la standard înainte de a fi trimis.

Indiferent dacă ați fost respins de alții sau nu o puteți face în propriul laborator, puteți vorbi cu noi. Dacă sunteți în căutarea științei-Peptide pentru a face sinteză dificilă și hidrofobă a peptidelor, cel puțin nu trebuie să încercați unul câte unul.

Am nevoie să-mi spui:
Secvență de peptide (sau informații despre țintă)
Ai mai pus pe cineva să o facă înainte? Care este rezultatul?
Cât (miligrame)
cerințe de puritate

Când vrei?

Vă oferim o evaluare a fezabilității și o ofertă de program în termen de 24 de ore.