Când folosim peptide, întâlnim adesea indicatorii de puritate și conținut de peptide. Mulți oameni se pot întreba de ce puritatea lor peptidică este de 95%, dar conținutul de peptide este de doar 80%. Acest lucru se datorează faptului că acestea sunt două concepte complet diferite.
Puritatea peptidei: Puritatea peptidei se referă la cantitatea de peptidă țintă detectată la 214 nm (214 nm este lungimea de undă de absorbție a lanțului peptidic) utilizând analiza HPLC.
Conținut de peptide: se referă la procentul de peptide în raport cu substanțele non-peptidice dintr-o probă.
Puritatea unei peptide se referă la conținutul peptidei țintă detectată prin HPLC la 214 nm (214 nm este lungimea de undă de absorbție a lanțului peptidic). Pe lângă peptida țintă, HPLC poate detecta impurități, inclusiv: secvențe șterse (secvențe țintă lipsesc unul sau mai multe resturi de aminoacizi), secvențe trunchiate (secvențe generate în timpul protecției) și secvențe incomplet deprotejate (rezultând procesul de sinteză sau procesul final de clivaj). Cu toate acestea, HPLC nu poate detecta apa și sărurile reziduale, cum ar fi trifluoracetatul (TFA) și acetatul. În timpul sintezei peptidei, secvența peptidei este scindată din rășină folosind TFA și o cantitate mică de TFA este, de asemenea, generată în timpul purificării. Prin urmare, capătul amino liber și alte lanțuri laterale ale peptidei, cum ar fi Arg, Lys și His, pot genera cantități mici de impurități TFA. O altă problemă este umiditatea. Peptidele sunt de obicei deshidratate prin liofilizare, dar chiar și așa, apa va exista în grade diferite în funcție de capacitatea de legare covalentă. Prin urmare, peptidele eliberate conțin în mod obișnuit săruri TFA și urme de apă, care sunt nedetectabile prin HPLC, conducând astfel la diferențe de conținut și puritate de peptide.
